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M-MLV Reverse Transcriptase, RNase H Minus

  • Cat.No.ON-047
  • Cas.No.
  • 來源重組大腸桿菌
  • 純度>95% by SDS-PAGE
  • 儲存條件-20℃
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產品描述:M-MLV Reverse Transcriptase, RNase H Minus是一種以RNA為模板的DNA聚合酶, 無RNase H活性。在RNase H區域進行點突變,增加了酶的熱穩定性,并且和野生型M-MLV Reverse Transcriptase相比,能夠得到更多量的全長cDNA。

來源:重組大腸桿菌

規格:200U/μL

活性單位定義:1單位活性定義為37℃、10分鐘內,摻入1nmole的dNTP到酸性不溶物質所需的酶量。

酶存儲緩沖液:20mM Tris-HCl (pH7.5 at 25℃), 0.1mM EDTA, 200mM NaCl, 0.01% NP-40, 1mM DTT and 50% Glycerol.

配套溶液:5×RT Reaction Buffer. Cat#ON-067, 250mM Tris-HCl (pH8.3, 25℃),375mM KCl, 15mM MgCl2, 50mM DTT.

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反應體系:

1. 在合成第一鏈DNA之前,將引物(約0.5μg)與模板(最高2μg)預先加熱70℃ 5min ,冰浴5min。加熱可以打開模板中的二級結構,冷卻是阻止二級結構的再次形成。

2. 向已經退火的引物/模板添加下述溶液:

M-MLV reverse transcriptase, RNase H minus50-200U
5×RT Reaction Buffer5μL
RNasin20U
dNTP (10mM each)1.25μL
Total25μL

3. 42℃ 反應60min。

儲藏溫度:-20℃

質控檢測:無DNase、Nickase、RNase污染

純度:SDS-PAGE純度:大于95%

1. Yu Chen, Weiguo Xu,Qining Sun, Biotechnol Lett. 31, 1051–1057 (2009).

2. Shufeng Liu, Stephen P. Goff, et al. FEBS Letters. 580, 1497-1501(2006).

3. Monica J. Roth, Naoko Tanese, and Stephen P. Goff, The Journal Of Biological Chemistry. 260, 9326-9335(1985).

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