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Alkaline Phosphatase,TAB5

  • Cat.No.ON-179
  • Cas.No.
  • 來源重組大腸桿菌
  • 純度>90% by SDS-PAGE
  • 儲存條件-20℃
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產品描述:Alkaline Phosphatase, TAB5 非特異性的催化DNA和RNA 5'和3'端的磷酸單酯鍵,也可以催化NTPs和dNTPs。80℃ 2 min可完全失活。

來源:重組大腸桿菌

規格:2.5U/μL

活性單位定義:1單位活性定義為37℃,30分鐘內,對限制性內切酶作用的5'端內陷的1μg pUC19 質粒去磷酸化所用的酶量。去磷酸化定義為在自連反應中對自身環化的抑制率> 95%,通過轉化到DH5α進行判斷。

酶存儲緩沖液:10mM Tris-HCl , 1mM MgCl2, 0.01mM ZnCl2, 50%(v/v) glycerol, pH7.4, 25℃.

配套溶液:10X Phosphatase Reaction Buffer, Cat#ON-180, 500mM Bis-Tris-Propane-HCl , 10mM MgCl2, 1mM ZnCl2, pH6, 25℃.


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10X Phosphatase Reaction Buffer, Cat#ON-180

反應流程:

DNA為底物:

1. 按下列配方配置反應液:

5'-Phosphate-DNA1μg
10X Phosphatase Reaction Buffer2μL
Alkaline Phosphatase, TAB52.5~5 units
Nuclease-free H2OTo 20μL

2. 37度保溫30分鐘

3. (可選)80度2分鐘熱失活Alkaline Phosphatase, TAB5。

RNA為底物:

1. 按下列配方配置反應液:

5'-Phosphate-RNA1μg
Nuclease-free H2OTo 15μL

2. 65度保溫5~10分鐘,然后立刻放冰上

3. 反應管中加入如下試劑

15μLHeat denatured RNA from step 1 (above)
2μL10X Phosphatase Reaction Buffer
2.5~5 unitsAlkaline Phosphatasae, TAB5
20 unitsRNase inhibitor (Recommend)
20μLTotal reaction volume


4. 37度保溫30分鐘


5. 選用下列一種方式終止反應:

A)直接放入-20度或-70度冰箱;

B)加入EDTA至終濃度大于2mM;

C)酚氯仿抽提,然后鹽/醇沉淀RNA

儲藏溫度:-20℃

質控檢測:無DNase、Nickase、RNase污染

純度:SDS-PAGE純度:大于90%

1. Maria Rina, Charalambos Pozidis, et al. Eur. J. Biochem. 267, 1230-1238 (2000).

2. Ellen Wang, Dimitris Koutsioulis, et al. J. Mol. Biol. 366, 1318-1331(2007).

3. Ping Li, Jon Beckwith, et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA.85,7685-7689(1988).

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