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Poly(A) Polymerase

  • Cat.No.ON-126
  • Cas.No.
  • 來源重組大腸桿菌
  • 純度>95% by SDS-PAGE
  • 儲存條件-20℃
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產品描述:Poly(A) polymerase是 以ATP為底物對RNA的3'羥基端添加腺苷酸形成polyA尾部結構。

來源:重組大腸桿菌

規格:5U/μL

活性單位定義:1單位活性定義為20μL的反應體系,37℃、10分鐘內,摻入1nmol AMP 到酸性不溶物質所需的酶量。

酶存儲緩沖液:20mM Tris-HCl (pH7.5, 25℃), 1mM EDTA, 300mM NaCl, 1mM DTT, 0.1%(v/v) Triton X-100, 50%(v/v) glycerol

配套溶液:10X poly(A) Polymerase Reaction Buffer, Cat#ON-127, 500mM Tris-HCl, (pH7.9, 25℃), 2.5M NaCl, 100mM MgCl2.


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10X poly(A) Polymerase Reaction Buffer, Cat#ON-127

操作流程:本流程適用于小于10μg的RNA添加150bp長度的poly(A)尾部結構。來源于IVT反應的RNA需要純化后,才能用于poly(A)加尾反應。

1. 按下列配方配置反應液:

RNA1~10μg
10X poly(A) Polymerase Reaction Buffer2μL
ATP(10mM)2μL
Poly(A) polymerase1μL
(可選) Rnase inhibitor20units
Nuclease-free H2Oto 20μL

2. 37度保溫60分鐘

3. 終止反應,加入EDTA至終濃度大于11mM

* 熱變性的RNA可能會提高加尾反應的效率

儲藏溫度:-20℃

質控檢測:無DNase、Nickase、RNase污染

純度:SDS-PAGE純度:大于95%

1. Bernstein P and Ross J (1989) Poly(A), poly(A) binding protein and the regulation of mRNA stability. Trends Biochem Sci 14: 373–377.

2. Gallie DR (1991) The cap and poly(A) tail function synergistically to regulate mRNA translational efficiency. Genes Dev 5: 2108–2116.

3. Krug, M.S. and Berger, S.L. (1987) Methods Enzymol. 152, 262.

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