產品描述:T7 RNA Polymerase是一種噬菌體編碼的以DNA為模板的RNA聚合酶。它識別特殊的啟動子——T7啟動子,以5'-3'的方向合成RNA。T7 RNA Polymerase的分子量為99kD,并由883個氨基酸構成。
來源:重組大腸桿菌
規格:50U/μL 或客戶定制
活性單位定義:1單位活性定義為37℃、60分鐘內,摻入5nmoles的rCTP到酸性不溶物質所需的酶量。
酶存儲緩沖液:20mM Tris-HCl PH 7.9, 100mM NaCl, 10mM DTT, 0.1% Triton X-100, 1mM EDTA, 50%(v/v) Glycerol.
配套溶液:10X IVT Reaction Buffer, Cat#ON-062, 400mM Tris PH7.9, 100mM DTT, 20mM Spermidine, 60mM MgCl2.
10X IVT Reaction Buffer without Mg2+ , Cat#ON-041, 400mM Tris PH7.9, 100mM DTT, 20mM Spermidine
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1.T7 RNA聚合酶對鹽抑制極其敏感,總體鹽濃度最好不超過50mM。
2.為了獲得更高的RNA產量:
1)可以通過提高NTP濃度(每個濃度可達10mM);
2)Mg2+濃度應高于NTP總濃度4~10mm;
3)將T7 RNA聚合酶提高到3萬單位/mL;
4)另外,無機焦磷酸酶添加到最終濃度為4單位/mL。
3.即使儲存在-20°C,隨著時間的推移,酶活性仍會明顯降低,可能是由于反應緩沖液中DTT的分解造成的。
若出現產量下降,試著像反應液中添加20mM DTT?;蛘吲渲茻oDTT的反應緩沖液,完成反應時加入新鮮DTT。
儲藏溫度:-20℃
質控檢測:無DNase、Nickase、RNase污染
純度:SDS-PAGE純度:大于95%
1. Chamberlin, M., McGrath, J. & Waskell, L. Nature 228, 227–31 (1970).
2. Davanloo, P., Rosenberg, A. H., Dunn, J. J. & Studier, F. W. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 81, 2035–9 (1984).