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T4 DNA Ligase

  • Cat.No.ON-157
  • Cas.No.
  • 來源重組大腸桿菌
  • 純度>95% by SDS-PAGE
  • 儲存條件-20℃
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產品描述:T4 DNA ligase能夠催化雙鏈DNA或RNA中的5'-磷酸和3'-OH發生反應,形成磷酸二酯鍵。T4 DNA ligase還能夠修復雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA雜交鏈中單鏈的缺口,可以連接粘末端,也可以連接平末端,反應時需要ATP的參與。

來源:重組大腸桿菌

規格:400U/μL

活性單位定義:1單位活性定義為16℃、30分鐘內,連接50% 6μg λ-HindIII DNA 所需的酶量。

酶存儲緩沖液:10mM Tris-HCl (pH7.4, 25℃), 50mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, and 50% (v/v)Glyercol.

配套溶液:10X T4 DNA Ligase Reaction Buffer, Cat#ON-158, 500mM Tris-HCl pH7.5, 25℃, 100mM MgCl2, 10mM ATP, 100mM DTT


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1. 文獻報道連接條件的多樣性。平末端連接通常連接的適宜溫度是15-20℃,時間是4-18h,而粘末端連接的適宜條件是室溫(22℃)3hr或者4-8℃過夜。

2. 由于PEG質量的多樣性,在連接反應中不推薦使用PEG。另外,克隆時使用PEG可能會帶來環化,并且殘留的PEG會抑制后續反應。

3. 連接反應需要控制質粒與插入片段的比例為1:3,以5kb質粒和1kb插入DNA為例完成下列連接反應:   

ComponentAmount
Nuclease-free H2Oto 20μL
Vector DNA100ng
Insert DNA60ng
10×T4 DNA ligase reaction buffer2μL
T4 DNA ligase1μL

室溫反應3h或者4℃過夜或者16℃ 4-18h。

儲藏溫度:-20℃

質控檢測:無DNase、Nickase、RNase污染

純度:SDS-PAGE純度:大于95%

1. Rossella Rossi, Alessandra Montecucco, et al. Nucleic Acids Research. 25, 2106–2113 (1997).

2. Xinxin Liu, Anliang Huang, et al. Protein Expression and Purification. 109, 79-84(2015).


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